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從事細(xì)胞培養(yǎng)工作時(shí)都有可能面臨細(xì)胞受到污染的境況。對于細(xì)胞的受污染問題，最為緊要的在于防范，因?yàn)橐坏┘?xì)胞受到污染，欲挽回已十分艱難，即便成功挽回，細(xì)胞的狀態(tài)亦會受損，進(jìn)而對實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成影響。怎么解決細(xì)胞被污染的問題？把細(xì)胞污染分為早期污染和晚期污染兩種情況。早期污染是細(xì)胞狀態(tài)變差，但依舊能保持生長，顯微鏡下未見明顯微生物或可見少量微生物。這種情況的話我們在換液時(shí)可以多用PBS洗幾次，然后加入適合的抗生素。早期污染只要發(fā)現(xiàn)及時(shí)，處理得當(dāng)，救回來的可能性還是很大的。晚期污染則是細(xì)...

一、buffer是干什么的？PCRbuffer（緩沖液）的作用就是給Taq酶提供一個(gè)最適的反應(yīng)條件。一般含有Tris－HCL，Mgcl2+等成分。不同的pcrbuffer成分可能不一樣。二、buffer基本組分1、Tris-HCl：具有良好的緩沖能力和對多種酶的兼容性，在PCR中的主要作用是調(diào)節(jié)反應(yīng)體系的pH值，使PCR反應(yīng)過程維持在一個(gè)穩(wěn)定的ph范圍內(nèi)；為酶反應(yīng)提供恒定的酸堿環(huán)境，保持酶的活性，確保PCR擴(kuò)增的順利進(jìn)行。2、K+：主要發(fā)揮穩(wěn)定酶活性和參與模板DNA的解鏈作用...

一、擴(kuò)增方式擴(kuò)增方式一般有兩種，對稱擴(kuò)增和不對稱擴(kuò)增。1、對稱擴(kuò)增使用等量的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物量隨著PCR循環(huán)呈指數(shù)增長，一般的PCR，使用的都是這種方式。由于TaqDNA聚合酶具有5’-3’外切酶活性，在PCR擴(kuò)增的過程中會水解探針，導(dǎo)致探針被耗盡，無法用于熔曲分析；若使用抗酶切修飾的探針，可一定程度降低水解，但由于探針阻礙了聚合酶通過，擴(kuò)增效率會大幅下降。對稱擴(kuò)增產(chǎn)生的互補(bǔ)雙鏈，會與探針競爭結(jié)合靶序列，不利于探針結(jié)合到靶序列上，熔曲分析可能會出現(xiàn)異常。優(yōu)點(diǎn)：靈敏...

一、病毒滴度病毒的滴度：單位體積(通常為mL)液體中具有生物活性的病毒顆粒數(shù)。滴度是一個(gè)病毒自身復(fù)制的數(shù)量概念，可分為物理滴度和感染滴度。物理滴度是指包含病毒基因組的病毒顆粒的濃度，可以通過通過定量PCR對病毒顆粒的基因組拷貝數(shù)進(jìn)行檢測，也可以通過測定病毒顆粒中的特定蛋白進(jìn)行定量，但物理滴度未考慮到病毒活性和感染效率，因此是不準(zhǔn)確的。感染滴度是指成功轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞的病毒顆粒的濃度，須通過細(xì)胞感染實(shí)驗(yàn)來測定，如利用定量PCR對細(xì)胞中的病毒基因拷貝數(shù)進(jìn)行檢測，或通過攜帶熒光的病毒感染細(xì)...

上次我們分享了IHC未染色或無信號的原因分析，這次讓我們來看看IHC染色不均勻是為什么吧。一、組織切片制備解釋：組織切片薄厚不均勻→建議：更換刀片二、組織固定1.解釋：酒精固定不足會產(chǎn)生偽影；→建議：延長固定時(shí)間；嘗試不同的固定液2.解釋：固定延遲導(dǎo)致抗原擴(kuò)散；建議：立即固定組織；可以考慮使用交聯(lián)固定劑三、脫蠟解釋：脫蠟不wan全→建議：使用新鮮的二甲苯四、抗體兼容性解釋：一抗可能結(jié)合其他抗原上的表位→建議：從多抗切換至單抗；嘗試不同的單抗五、透化解釋：細(xì)胞膜被破壞，膜蛋白丟...