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如何選擇蛋白表達(dá)系統(tǒng)?

 更新時間:2023-09-11    點(diǎn)擊量:1104

在蛋白表達(dá)系統(tǒng)的相關(guān)研究中,從頭合成蛋白質(zhì)并不是一個可行的選擇。因此需要借助活細(xì)胞或細(xì)胞器用作生產(chǎn)和構(gòu)建蛋白質(zhì)的工廠。那么你知道該如何選擇蛋白表達(dá)系統(tǒng)嗎?讓我們一起來看看吧!

目前,較為主流的表達(dá)宿主有大腸桿菌(E.coli)、畢赤酵母(P.pastoris)、昆蟲-桿狀病毒(Bac-to-Bac系統(tǒng))以及哺乳動物細(xì)胞系(CHOHEK293)等。

一、細(xì)菌

優(yōu)點(diǎn):

1. 遺傳背景清楚;

2. 繁殖快、成本低、抗污染能力強(qiáng);

3. 表達(dá)量高、表達(dá)產(chǎn)物分離純化相對簡單、穩(wěn)定性好;4. 商品化的載體和菌株種類非常齊全、適用范圍廣等。

缺點(diǎn):

1. 沒有真核轉(zhuǎn)錄后加工的功能,沒有翻譯后修飾;

2. 表達(dá)的蛋白質(zhì)經(jīng)常是不溶的,容易形成包涵體;

3. 有一些真核蛋白的產(chǎn)量和活性較低;

4. 難以表達(dá)大分子哺乳動物蛋白質(zhì);

5. 可能會產(chǎn)生一些致熱源(內(nèi)毒素)

二、酵母

優(yōu)點(diǎn):

1. 結(jié)合了真核和原核的優(yōu)點(diǎn),可生產(chǎn)翻譯后修飾的分泌蛋白和胞內(nèi)蛋白;

2. 經(jīng)濟(jì)高效,部分真核翻譯后修飾,如糖基化,磷酸基化。

缺點(diǎn):

1. 可能形成不正確的蛋白糖基化;

2. 培養(yǎng)上清多糖濃度高不利于純化

三、哺乳動物穩(wěn)定表達(dá)系統(tǒng)

優(yōu)點(diǎn):

1. 蛋白活性:翻譯后再加工修飾折疊的功能產(chǎn)生的外源蛋白質(zhì),更接近于蛋白質(zhì)的天然狀態(tài)。

2.正確的高級結(jié)構(gòu)(如糖基化)。

3.在蛋白的起始信號、加工、分泌、糖基化方面具有優(yōu)勢,適合表達(dá)完整的大分子蛋白。

缺點(diǎn):

培養(yǎng)基成本高,培養(yǎng)周期長,至少一個月以上,培養(yǎng)較困難,表達(dá)量較低。構(gòu)成復(fù)雜、操作技術(shù)要求高、表達(dá)產(chǎn)量不大、產(chǎn)率低

四、哺乳動物瞬時表達(dá)系統(tǒng)

優(yōu)點(diǎn):

1. 適度快速表達(dá)

2. 很好表達(dá)膜蛋白和分泌蛋白

3. 所有蛋白都能進(jìn)行折疊和最真實(shí)的翻譯后修飾

缺點(diǎn):

1. 比較貴

2. 胞內(nèi)蛋白產(chǎn)量低

總之,各種表達(dá)系統(tǒng)各有優(yōu)缺點(diǎn),因此,選擇表達(dá)系統(tǒng)時,應(yīng)充分考慮各種因素更多有關(guān)蛋白表達(dá)系統(tǒng)的選擇問題,請聯(lián)系天津益元利康科技有限公司:

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